三維試驗是一種檢測β-內酰胺酶(ESBL)的方法，在傳統的紙片擴散法基礎上發展而來。
紙片擴散法藥敏試驗，將細菌接種在瓊脂平板表面，貼上藥物紙片。紙片上的藥物向周圍的培養基中擴散，構成一維。瓊脂平板表面的細菌生長，產生了抗藥性酶，向培養基中擴散，構成另一維。所以，紙片擴散法是二維試驗。三維試驗，在紙片旁邊的瓊脂刻一深紋，其中加入受試菌液。細菌生長後，產生的抗藥性酶向四周的瓊脂中擴散，構成第三維。檢測ESBL，接種細菌後，貼上第三代頭孢菌素紙片，在紙片邊上的深紋中加被測菌液。紋中的細菌生長時產生ESBL，擴散到周圍的培養基中。擴散到培養基中的抗生素，遇到ESBL後被水解，不能對細菌生長產生抑制效應，形成的只能是變形的抑菌環。細菌不產生ESBL，抑菌環規則。目前，三維試驗是檢測ESBL的標準方法。
